Программа ЭКО + ICSI с получением эпидидимальных спермиев была проведена у 32 супружеских пар (1 группа), с применением криоконсервированных спермиев - у 26 супружеских пар (2 группа).

         Клинико-лабораторные данные женщин в обеих группах были сравнимы. Возраст женщин в первой группе составил 33,6±  2,8 лет и 34,2±3,2 – во второй. Стимуляция проводилась с применением  агонистов гонадотропин-релизинг гормона (ГнРГ)  со стартовой дозой рекомбинантного фолликулостимулирующего гормона (ФСГ) 225 МЕ. MESA/PESA проводились в день трансвагинальной пункции яичников. Перенос эмбрионов выполняли на 5-й день после аспирации фолликулов.

         Всем мужчинам было проведено общее андрологическое обследование, анализ спермы, исследование гормонального статуса – ФСГ, ЛГ, пролактин, тестостерон; цитогенетический анализ лимфоцитов периферической крови.

         При проведении MESA/PESA получали аспират, который немедленно помещали в среду Sperm preparaition medium (COOK, Австралия). При обнаружении сперматозоидов аспират центрифугировали при 900g 10 мин. Осадок ресуспензировали в 100 мкл среды, подсчитывали количество сперматозоидов, их морфологию и кинетическую активность.  Спермии криоконсервировали  по двухэтапной програмне с рас твором глицерина в качестве криопротектора  /3 /.

         Деконсервирование спермиев проводили путем помещения виал в водяную баню с температурой 37º С. Немедленно проводили процедуру удаления криопротектора путем центрифугирования среды при 900g 10 мин. Надосадок удаляли. К осадку добавляли 100 мкл среды Sperm preparaition medium (COOK, Австралия). Сперматозоиды в микрокаплях среды эквилибрировали в инкубаторе при температуре 37ºС, 6% СО2 10 минут. Оценивали количество  подвижных сперматозоидов с правильной морфологией. Для проведения ICSIпроводили селекцию спермиев по морфо-функциональным характеристикам .

Перенос эмбрионов  в полость матки осуществлялся на 5 сутки, учитывая классификацию D. Gardner /9/.

                   Среднее количество спермиев в первой и второй группе составило 178,9±16,2  и 171,2±18,6.

Обращает на себя внимание особенность морфо-функциональных характеристик эпидидимальных спермиев, а именно незначительное количество спермиев и снижение активноподвижной фракции  по сравнению с нормальными показателями ВОЗ. Так, количество активноподвижных спермиев в первой группе составило 12±0,8%, во второй - 8±0,8%.

         Спермии находились в криоконсервированном состоянии от 1 месяца до 1 года. Частота жизнеспособности спермиев после криоконсервирования составила 92±8,8%.   

Таким образом, факторы криоконсервирования не влияют на выживаемость спермиев, что дало возможность их использования в процедуре ICSI.

         Было оплодотворено 187 и 255 ооцитов на стадии МII , что составило 7,48±1,36 и 8,22±1,62 ооцитов на пациентку, для первой и второй групп, соответственно.

Оплодотворилось  86,6±6,6% и 80,0±8,0% ооцитов.  Морфологические характеристики эмбрионов на 5 сутки культивирования: в первой группе количество эмбрионов первой категории качества составило 68,5±5,5, во второй группе - 55,0±4,2%% .

Частота наступления беременности в группе с применением криоконсервированных спермиев составила 53,1%, в группе без криоконсервирования – 46,1%.

                  Наши данные согласуются с данными других исследователей, которые продемонстрировали увеличение частоты наступления беременности при использовании криоконсервированных эпидидимальных спермиев / 5,6,11,12,17/.

По данным / 13  / частота наступления беременности у пациентов с криоконсервированием эпидидимальных спермиев не отличалась от таковой в группе без криоконсервирования.

На достаточно большом материале продемонстрирована генетическая безопасность криоконсервирования эпидидимальных сперматозоидов. Показано, что частота оплодотворения криоконсервированными спермиями не отличается от данного показателя в группе с применением нативных спермиев (75.67% против 76.49%), частота эмбрионов хорошего качества составила 64.96% и 66.09%, частота наступления беременности -  55.21% и 57.22%   /21/.

         Авторы отмечают высокую частоту спонтанных абортов 25,7% в случае MESE/ICSI и 31,6% в случае TESE/ICSI  / 6/.

 Такие данные можно объяснить высокой частотой хромосомных аномалий у мужчин как с обструктивной, так и необструктивной азооспермией – 14%-17%-20,3% (12).

По данным /15/ частота рождения детей с хромосомными аномалиями у мужчин с азооспермией в 10 раз выше по сравнению с общей популяцией.

В работе /22/ представлены результаты ICSI с криоконсервированными спермиями, полученными при перкутанной биопсии яичка. Авторы делают вывод о необходимости изучения состояния генетического аппарата спермиев после криоконсервирования.

Проанализированы результаты 493 супружеских пар, которые провели процедуру ICSI c криоконсервированными спермиями, полученными методами TESA, MESA, MESE, PESA. Авторы делают вывод, что частота наступления беременности зависит от метода получения спермиев. Интересным является то, что частота наступления беременности в группе с криоконсервированными спермиями, независимо от метода их получения, выше, чем в группе, где спермии не были криоконсервированы  / 13,14,16/.

Ретроспективное исследование 156 циклов с применением криоконсервированных спермиев показало, что активация эмбрионального генома, отмечаемая по частоте 8-ми клеточного блока развития и скорости морфогенеза не отличалась в группе с криоконсервированными спермиями, по сравнению с нативными  /19/.

Интересным явился факт наступления одноплодной беременности при введении единственного замороженно-оттаянного спермия в ооцит, аспирированного в натуральном цикле /11/.

Выводы:

Проведение ICSI сперматозоидами, полученными в результате МЕSА/PESA является эффективным методом лечения пациентов с азооспермией и дает им единственную возможность иметь генетическое потомство.

         Криоконсервирование не оказывает отрицательного влияния на  оплодотворение, скорость морфогенеза, качество эмбрионов и частоту наступления беременности.

Криоконсервирование спермиев является необходимой стратегией при тяжелом мужском факторе бесплодия.  Эффективное криоконсервирование небольшого числа сперматозоидов уменьшает количество хирургических вмешательств, позволяет избежать осложнений и расходов, связанных с повторными хирургическими операциями и предоставляет свободу в выборе времени проведения процедуры программированного зачатия.