Анализ фрагментации ДНК в нативных и криоконсервированных спермиях человека 

Петрушко М.П., Пиняев В.И.,  Правдина С.С.,  Чуб Н.Н.

Введение: На долю мужского фактора всех случаев бесплодия приходится 50%. В связи с этим в настоящее время все большее внимание  уделяется нарушениям отцовского генома, причиной которых может быть фрагментация ДНК сперматозоидов, включающая двухцепочечные и одноцепочечные разрывы молекулы ДНК. Кроме того, в методиках репродуктивных технологий все чаще применяется криоконсервирование спермиев человека, поэтому большое значение имеет определение влияния факторов криоконсервирования на уровень фрагментации ДНК.

Цель: Целью данного исследования явилось выяснение частоты фрагментации ДНК в нативных и криоконсервированных спермиях пациентов, участвующих в лечении бесплодия методами вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ).

Материалы и методы: Технологию ВРТ проводили по общепринятой методике. Изучение фрагментации ДНК проводили методом TUNEL. Исследовали 30 нативных эякулятов (10 - с нормозооспермией, 12 -  олигоастенотератозооспермией и 8 образцов спермиев, полученных при биопсии яичка) и 28 после криоконсервирования (10 - нормозооспермия, 10 - олигоастенотератозооспермия, 8 – эпидидимальных образцов).

Результаты:

Результаты представлены в таблице.

По рекомендации ВОЗ, в норме, процент сперматозоидов с фрагментацией ДНК не должен превышать 30%.

Установлено, что фрагментация ДНК в эякуляторных сперматозоидах существенно выше, чем в тестикулярных.

         Фрагментация ДНК ниже в группе мужчин с нормозооспермией в сравнении с  олигоастенотератозооспермией, таким образом, морфо-функциональные характеристики эякулята могут служить маркером интактной ДНК.

         Факторы криоконсервирования не оказывают существенного влияния на компактизацию ДНК при нормозооспермии, при олигоастенозооспермии этот показатель достоверно выше в криоконсервированных образцах, по-сравнению с нативными.

         Методом снижения риска, который влечет за собой высокий уровень фрагментации ДНК, особенно при плохом качестве бластоцист и неудачных циклах, может служить применение тестикулярных сперматозоидов, поскольку тестикулярные сперматозоиды имеют значительно более низкие показатели фрагментации ДРК, чем эякуляторные.

         Параметр состояния ДНК спермиев имеет самостоятельное диагностическое и прогностическое значение для пациентов с бесплодием, прибегающим к ВРТ. Несмотря на то, что механизмы образования разрывов не до конца ясны, исследование фрагментации ДНК сперматозоидов повысить информативность анализа спермы и служить эффективным прогностическим инструментом, выявляющим мужской фактор нарушения фертильности.