Программу ЭКО в естественном цикле проводили с гормональным мониторингом и фолликулометрией /13/. Этап культивирования ооцитов и эмбрионов проводили согласно /9 /.

При проведении перкутанной аспирация сперматозоидов из придатка яичка (PESA) получали аспират, который центрифугировали при 900g 10 минут. Осадок ресуспензировали в 100 мкл среды и криоконсервировали двухэтапным методом /1/.

Деконсервирование спермиев проводили путем помещения виалы в водяную баню при температуре 37 ºС на 10 минут. Размороженный образец центрифугировали при 900g 10 минут. Надосадок удаляли. К осадку добавляли 1 мл  культуральной среды. Деконсервированные и отмытые спермии в микрокапле среды  помещали в инкубатор при температуре 37ºС, 6% СО2. Через 1 час оценивали количество подвижных сперматозоидов с правильной морфологией, которыми проводили процедуру ICSI.

Супружеская пара с диагнозом первичное бесплодие сочетанного генеза ( трубно-перитонеальный и мужской фактор)  прошла программу лечения бесплодия методом ЭКО/ICSI/PESA. Стаж бесплодного брака – 22 года. Возраст супругов: женщина – 42 года, мужчина – 53 года.

Было проведено общее клинико-лабораторное обследование супругов, исследование гормонального статуса,  цитогенетический анализ лимфоцитов периферической крови.

Учитывая возраст супругов, сниженный овариальный резерв женщины и наличие единичных эпидидимальных спермиев было принято решение о проведении программы ЭКО в естественном цикле.

При трансвагинальной пункции произведена аспирация фолликула диаметром 18 мм. Выделен 1 ооцит. При денудации ооцита перед процедурой ICSI произошел разрыв ZP с вытеканием цитоплазмы (рис. 1 a). Произведена инъекция единичного спермия в цитоплазму ооцита. Через 24 ч зарегистрировано появление двух пронуклеусов.  Наблюдение за развитием эмбриона in vitro продемонстрировало нормальные темпы дробления эмбриона через 48,72 и 96 ч (рис.1 b, c). На пятые сутки была сформирована бластоциста (рис. 1d).

Программу ЭКО в естественном цикле проводили с гормональным мониторингом и фолликулометрией /13/. Этап культивирования ооцитов и эмбрионов проводили согласно /9 /.

При проведении перкутанной аспирация сперматозоидов из придатка яичка (PESA) получали аспират, который центрифугировали при 900g 10 минут. Осадок ресуспензировали в 100 мкл среды и криоконсервировали двухэтапным методом /1/.

Деконсервирование спермиев проводили путем помещения виалы в водяную баню при температуре 37 ºС на 10 минут. Размороженный образец центрифугировали при 900g 10 минут. Надосадок удаляли. К осадку добавляли 1 мл  культуральной среды. Деконсервированные и отмытые спермии в микрокапле среды  помещали в инкубатор при температуре 37ºС, 6% СО2. Через 1 час оценивали количество подвижных сперматозоидов с правильной морфологией, которыми проводили процедуру ICSI.

Супружеская пара с диагнозом первичное бесплодие сочетанного генеза ( трубно-перитонеальный и мужской фактор)  прошла программу лечения бесплодия методом ЭКО/ICSI/PESA. Стаж бесплодного брака – 22 года. Возраст супругов: женщина – 42 года, мужчина – 53 года.

Было проведено общее клинико-лабораторное обследование супругов, исследование гормонального статуса,  цитогенетический анализ лимфоцитов периферической крови.

Учитывая возраст супругов, сниженный овариальный резерв женщины и наличие единичных эпидидимальных спермиев было принято решение о проведении программы ЭКО в естественном цикле.

При трансвагинальной пункции произведена аспирация фолликула диаметром 18 мм. Выделен 1 ооцит. При денудации ооцита перед процедурой ICSI произошел разрыв ZP с вытеканием цитоплазмы. Произведена инъекция единичного спермия в цитоплазму ооцита. Через 24 ч зарегистрировано появление двух пронуклеусов.  Наблюдение за развитием эмбриона in vitro продемонстрировало нормальные темпы дробления эмбриона через 48,72 и 96 ч. На пятые сутки была сформирована бластоциста.

Принято решение о переносе эмбриона в полость матки пациентки. На 14 сутки после эмбриопереноса показатели гормонального мониторинга были следующими: уровень эстрадиола  - 477 пг/мл, прогестерона – 10,0 нг/мл, чХГ – 101,1 ммЕ/мл.

Через 3,5 нед после переноса эмбриона диагностирована моноамниотическая монохориальная беременность, уровень  чХГ – 20 000 ммЕ/мл.

В 11 недель беременности проведен первый акушерский скрининг. В данный момент беременность 28 нед развивается успешно.

Проведение ЭКО в естественном цикле в последнее время вызывает все больший интерес у специалистов, занимающихся репродуктивным здоровьем /3,10,12/, ввиду приемлемости для пациенток с плохим ответом яичников на стимуляцию суперовуляции и множественными неудачными попытками ЭКО. В то же время этот подход имеет и свои недостатки, а именно преждевременная овуляция, отсутствие оплодотворения, плохое качество эмбриона.

В стимулированных циклах ВРТ ооциты без ZP обачно выбраковываются.

Существует лишь несколько публикаций, описывающих случаи успешного оплодотворения таких ооцитов методом ICSI, с последующим дроблением и развитием эмбриона до стадии бластоцисты in vitro  /6,8,11/. Сообщения об успешной беременности после оплодотворения ооцитов, лишенных прозрачной оболочки единичны /16,17/. 

Zona pellucida -  гликопротеиновая оболочка вокруг плазматической мембраны яйцеклетки играет важную роль в процессе оплодотворения и раннего эмбрионального развития,  архитектонике клетки, способствуя ранней поляризации эмбриона на стадии 8-ми бластомеров.

Морфология прозрачной оболочки ооцитов является одним из показателей, на основании которых можно прогнозировать успех процедур ВРТ с использованием этих клеток. Так, например, считается, что утолщенная прозрачная оболочка может быть фактором бесплодия. При этом толщина прозрачной оболочки увеличивается в возрастом, а также при применении стимуляции высокими дозами гонадотропинов /4/ , что свидетельствует о влиянии гормонального окружения на толщину оболочки. Слишком толстая прозрачная оболочка может быть показанием к применению ICSI (товщина ≥ 20 микрометров), поскольку при оплодотворении методом IVF сперматозоиды могут быть не в состоянии пройти через такую оболочку. Также слишком толстая прозрачная оболочка может препятствовать экспансии и вылуплению бластоцисты, и в этом случае необходимо рассматривать вопрос о применении  вспомогательного хэтчинга.

В отличие от утолщенной, тонкая прозрачная оболочка не является фактором, снижающим оплодотворение и развитие эмбрионов /15,18/, а даже, напротив, повышает показатели оплодотворения /2/, но слишком тонкая оболочка больше подвержена повреждениям, что может привести к выходу ооцита из оболочки.

 Причиной формирования тонкой прозрачной оболочки, вероятнее всего  являются  генетические факторы (нарушение экспрессии белков группы ZP), о чем можно судить по данным, полученным на животных /14/.

Зрелость  ооцитов без ZP оценить сложно из-за невозможности констатировать наличие первого полярного тела. Если веретено деления будет нарушено процедурой ICSI, возможно возникновение анеуплоидных эмбрионов. 

Показано, что присутствие ооцитов, лишенных прозрачной оболочки, среди всех выделенных ооцитов, не коррелирует с числом переносимых эмбрионов, процентом беременности или абортов, то есть присутствие таких ооцитов не является маркером снижения общего качества ооцитов /4/.

Считается, что удаление зона pellucida может оказать влияние на межклеточные контакты в раннем периоде развития, в связи с чем такие эмбрионы не способны к компактизации /7 /.

            Отмечено, что эмбрионы без zona pellucida формируют бластоцисты с несколькими бластоцелями /19/.

            Некоторые исследователи  проводят процедуру ICSI для ооцита, лишенного прозрачной оболочки, не очищая его от клеток кумулюса во избежание повреждений /17/. Однако если ооцит вышел из ZP при денудации,  рекомендовано бережное  инъецирование для введения спермия при ICSI.

В доступной литературе мы встрелили одно сообщение о рождении ребенка после переноса криоконсервированной бластоциты, полученной после инъецирования ооцита без ZP /16/.

Вывод: Клинический случай, описанный в работе, свидетельствует об успешном наступлении беременности после оплодотворения методом ICSI ооцита, лишенного zona pellucida .  Это свидетельствует в пользу того, что нужно использовать каждый шанс для наступления беременности у пациентов ВРТ-клиник, порой, даже в самых непредсказуемых ситуациях.